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聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)因其快速、方便等优势,目前占据了临床分子诊断市场的90%。这种创新且简便的技术,是分子诊断领域的强大工具,也是如今许多主流癌症诊断的基础。随着医学研究的不断发展,肿瘤检测、靶向治疗随之越来越成熟。研究发现,许多癌症/遗传病与基因突变、病毒感染等具有显著关联,同时,靶向治疗的前提是对药物的分子靶点进行基因检测,找到导致肿瘤或遗传病发生的基因突变。
ARMS-PCR即扩增阻滞突变系统PCR(Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR),又称为等位基因特异性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR),是一项在PCR基础上发展起来的新方法,可检测出DNA中各种点突变,是目前国际上肿瘤个体化分子检测最重要、应用最广泛的技术之一,其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。
ARMS PCR的工作原理
ARMS PCR引物设计时等位基因两条上游引物中3’端核苷酸不同,两条引物分别对野生型和突变型进行特异性扩增时,与模板不能完全匹配的上游引物将不能与模板完全形成互补碱基对,形成错配,一方面,碱基错配会影响产物延伸,另一方面,错配碱基会改变等位基因变体的退火温度,最终导致不同基因型扩增效果的差异,对差异进行检测即可确认基因型。
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图1ARMS-PCR的工作原理[1]
ARMS-PCR产物的检测
1
琼脂糖凝胶电泳取一定量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,通过条带的位置来确定基因型。
2
熔解曲线分析ARMS-PCR体系中加入染料/探针,对PCR产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线的位置来确定基因型。
3
实时荧光检测采用TaqMan探针,通过分析荧光数据确认其基因型。目前市场主流即为该检测方式(ARMS-qPCR)。
ARMS-PCR是遗传病诊断最准确的技术工具之一,在癌症/遗传病筛查和靶向治疗领域也有着重要贡献。其主要优势是操作便捷、快速、灵敏度高,对器材成本要求较低,有大量成熟的商品化试剂盒可供使用等。
表1国家药品监督管理局已注册ARMS相关检测试剂盒
ARMS-PCR的高特异性要求
从ARMS-PCR的原理上来看,该检测方法对PCR体系的特异性要求较高。保证特异性可以从以下两方面着手
优化引物设计常见手段之一是引入超过一个错配碱基,通常在3’端的倒数第二或第三位,与末端错配碱基共同作用,使不互补的扩增产物显著降低;同时减少PCR扩增的循环数,因为循环数增加会增加假阳性结果的几率。
调整反应体系中相关组分以提高反应体系的特异性。
近岸蛋白全新推出针对ARMS方法调配的qPCR预混液(目录号E406),具有超高的阻滞扩增性能。已进行多样本、多靶标验证,客户反馈性能优异,更有多重ARMS-qPCR预混液提供测试。
产品特点
高特异性超高的阻滞扩增性能
通用性好经多样本、多靶标验证
高稳定性全预混体系37℃加速7天,产品性能不变
数据展示
高特异性
超高的阻滞扩增性能,显著区分突变型与野生型(客户样本)。
通用性好
经多样本、多靶标验证
扩增性能验证
高稳定性
全预混体系稳定性验证在扩增体系中加入引物、探针,37℃存放0、1、3、5、7天,产品性能不变。
质粒模板浓度梯度10pg/μl、1pg/μl、100fg/μl、10fg/μl、1fg/μl、0.1fg/μl。
客户项目及反馈
肿瘤相关基因突变的SNP分型,性能优于客户测试的其他品牌产品;
白血病融合基因检测,微滴式数字PCR(ddPCR)平台,性能优于客户测试的其他品牌产品。
推荐产品
相关产品
参考文献
[1] The Amplification Refractory Mutation System, Part of the Methods in Molecμlar Medicine™ book series (MIMM,volume 16). Y. M. Dennis Lo
苏州近岸蛋白质科技股份有限公司(简称近岸蛋白)深耕重组蛋白行业十余年,是一家专注于蛋白质技术与应用解决方案的高新技术企业,主营业务为生物药、体外诊断、mRNA疫苗药物、生命科学基础研究等领域的原料与技术解决方案,包括靶点及因子类蛋白、重组抗体、酶及试剂的研发、生产和销售及相关技术服务。公司在上海、苏州和菏泽建有研发、生产基地。
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基因点突变检测利器之ARMS,让肿瘤/遗传病无处遁形
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)因其快速、方便等优势,目前占据了临床分子诊断市场的90%。这种创新且简便的技术,是分子诊断领域的强大工具,也是如今许多主流癌症诊断的基础。随着医学研究的不断发展,肿瘤检测、靶向治疗随之越来越成熟。研究发现,许多癌症/遗传病与基因突变、病毒感染等具有显著关联,同时,靶向治疗的前提是对药物的分子靶点进行基因检测,找到导致肿瘤或遗传病发生的基因突变。
ARMS-PCR即扩增阻滞突变系统PCR(Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR),又称为等位基因特异性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR),是一项在PCR基础上发展起来的新方法,可检测出DNA中各种点突变,是目前国际上肿瘤个体化分子检测最重要、应用最广泛的技术之一,其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。
ARMS PCR的工作原理
ARMS PCR引物设计时等位基因两条上游引物中3’端核苷酸不同,两条引物分别对野生型和突变型进行特异性扩增时,与模板不能完全匹配的上游引物将不能与模板完全形成互补碱基对,形成错配,一方面,碱基错配会影响产物延伸,另一方面,错配碱基会改变等位基因变体的退火温度,最终导致不同基因型扩增效果的差异,对差异进行检测即可确认基因型。
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ARMS-PCR产物的检测
1
琼脂糖凝胶电泳取一定量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,通过条带的位置来确定基因型。
2
熔解曲线分析ARMS-PCR体系中加入染料/探针,对PCR产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线的位置来确定基因型。
3
实时荧光检测采用TaqMan探针,通过分析荧光数据确认其基因型。目前市场主流即为该检测方式(ARMS-qPCR)。
ARMS-PCR是遗传病诊断最准确的技术工具之一,在癌症/遗传病筛查和靶向治疗领域也有着重要贡献。其主要优势是操作便捷、快速、灵敏度高,对器材成本要求较低,有大量成熟的商品化试剂盒可供使用等。
表1国家药品监督管理局已注册ARMS相关检测试剂盒
ARMS-PCR的高特异性要求
从ARMS-PCR的原理上来看,该检测方法对PCR体系的特异性要求较高。保证特异性可以从以下两方面着手
1
优化引物设计常见手段之一是引入超过一个错配碱基,通常在3’端的倒数第二或第三位,与末端错配碱基共同作用,使不互补的扩增产物显著降低;同时减少PCR扩增的循环数,因为循环数增加会增加假阳性结果的几率。
2
调整反应体系中相关组分以提高反应体系的特异性。
近岸蛋白全新推出针对ARMS方法调配的qPCR预混液(目录号E406),具有超高的阻滞扩增性能。已进行多样本、多靶标验证,客户反馈性能优异,更有多重ARMS-qPCR预混液提供测试。
产品特点
高特异性超高的阻滞扩增性能
通用性好经多样本、多靶标验证
高稳定性全预混体系37℃加速7天,产品性能不变
数据展示
高特异性
超高的阻滞扩增性能,显著区分突变型与野生型(客户样本)。
通用性好
经多样本、多靶标验证
扩增性能验证
高稳定性
全预混体系稳定性验证在扩增体系中加入引物、探针,37℃存放0、1、3、5、7天,产品性能不变。
质粒模板浓度梯度10pg/μl、1pg/μl、100fg/μl、10fg/μl、1fg/μl、0.1fg/μl。
客户项目及反馈
1
肿瘤相关基因突变的SNP分型,性能优于客户测试的其他品牌产品;
2
白血病融合基因检测,微滴式数字PCR(ddPCR)平台,性能优于客户测试的其他品牌产品。
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参考文献
[1] The Amplification Refractory Mutation System, Part of the Methods in Molecμlar Medicine™ book series (MIMM,volume 16). Y. M. Dennis Lo
苏州近岸蛋白质科技股份有限公司(简称近岸蛋白)深耕重组蛋白行业十余年,是一家专注于蛋白质技术与应用解决方案的高新技术企业,主营业务为生物药、体外诊断、mRNA疫苗药物、生命科学基础研究等领域的原料与技术解决方案,包括靶点及因子类蛋白、重组抗体、酶及试剂的研发、生产和销售及相关技术服务。公司在上海、苏州和菏泽建有研发、生产基地。
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